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BCA法测透皮多肽浓度

选用Franz扩散池,如下图

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BCA法原理:

​ BCA法中选用牛血清白蛋白(BSA)作为标准蛋白,原理是蛋白质中的酪氨酸、色氨酸等在碱性环境下可以将二价铜离子还原为一价铜离子,BCA与一价铜离子相互作用,两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色复合物,可在562nm显示出强烈的吸光性。

注意事项:

1、BCA法中的标准蛋白BSA与待测多肽的组成不同,多肽中的酪氨酸等含量更多的话会有更强的还原铜离子的能力,因此选择特定多肽代替BSA作标准曲线可以更加准确地得到待测液体中的多肽浓度[1]。

2、取样点要在接受池内部,尽量靠近中间,以获得更加准确的浓度。

3、皮肤、聚合物膜等需要拉平整,不然会由于液位高低产生凹面或者凸面,影响接触面积大小,同时接受池中尽量不产生气泡,以免气泡减少接触面积,一开始可以排气泡,但上方加入了液体后,会变困难。

4、该试剂的准确测定范围估计在 20-2000 μg/mL 左右,10mg/mL多肽无法得到准确结果。

5、多肽溶液可能会在管壁吸附,应尽量减少在管中孵育时间,尽量减少转移次数,尽量使用新鲜配置的多肽溶液,如需保存,使用体积/管壁比大的容器,并且使用高浓度多肽溶液[2]。


参考文献:

[1]张璐瑶, 朱伟, 李瑛傑, 等. 消光系数法与二喹啉甲酸法测定多肽浓度精密度的比较[J]. 华中科技大学学报(医学版), 2023, 52(2): 206-211.

[1]KRISTENSEN K, HENRIKSEN J R, ANDRESEN T L. Adsorption of Cationic Peptides to Solid Surfaces of Glass and Plastic[J/OL]. PLOS ONE, 2015, 10(5): e0122419. DOI:10.1371/journal.pone.0122419.

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